Plasmide CRISPR/Cas9 KO TRPC5 (m): sc-423516
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- TRPC5 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique TRPC5, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TRPC5 Antibody (1C8): sc-293259
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO TRPC5 (m) | sc-423516 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Trpc5 code TRPC5, un canal cationique non sélectif de la famille des canaux TRP canoniques, qui médie l’influx de Ca²⁺ en réponse à des signalisations dépendantes des récepteurs et des lipides. TRPC5 participe à des voies dépendantes de la PLC en aval des GPCR et des récepteurs à activité tyrosine kinase, modulant l’excitabilité membranaire, l’homéostasie du calcium intracellulaire et des programmes transcriptionnels dépendants du calcium. Dans les systèmes murins, TRPC5 est largement étudié dans les neurones et dans des contextes vasculaires/endothéliaux, où il influence la fonction synaptique, la dynamique des neurites, les réponses mécanorésensibles et la signalisation sensible au redox. Une activité dérégulée de TRPC5 a été associée à des processus liés à la signalisation de la douleur, à des comportements de type anxieux, au remodelage vasculaire et aux mécanismes de lésion rénale, ce qui soutient son utilisation dans des modèles de neurobiologie, de biologie cardiovasculaire et de physiopathologie rénale.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TRPC5 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Trpc5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Trpc5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Trpc5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TRPC5.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Trpc5 pour l'étude de la signalisation de TRPC5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Trpc5 essentiels à la fonction de TRPC5
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Trpc5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le TRPC5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TRPC5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Trpc5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le TRPC5 plasmide HDR (m) et le TRPC5 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Trpc5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Trpc5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.