Plasmide Double Nickase (h) TRPC3/6/7: sc-403740-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TRPC3/6/7 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TRPC3/6/7 Double Nickase (h) et le plasmide TRPC3/6/7 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TRPC3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TRPC6 Antibody (B-10): sc-515837
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) TRPC3/6/7 | sc-403740-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) TRPC3/6/7 | sc-403740-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TRPC3 code un canal cationique non sélectif, activé par le diacylglycérol, de la sous-famille TRPC, qui contribue à l’entrée de Ca2+ dépendante des récepteurs et à la dépolarisation de la membrane. TRPC3 forme des assemblages fonctionnels avec les sous-unités apparentées TRPC6 et TRPC7, reliant la signalisation des GPCR et des récepteurs à activité tyrosine kinase à des programmes transcriptionnels dépendants du calcium, au remodelage du cytosquelette et à des réponses contractiles. L’activité du canal est généralement engagée en aval des voies PLCβ/PLCγ et modulée par la signalisation lipidique, des cascades de kinases et l’état rédox cellulaire. Une signalisation TRPC3/6/7 dérégulée a été impliquée dans le remodelage pathologique et l’excitabilité dans de nombreux tissus, notamment les systèmes cardiovasculaire, rénal et nerveux, ce qui en fait un nœud pertinent pour l’étude des voies de stress et de différenciation pilotées par le calcium.
TRPC3/6/7 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TRPC3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TRPC3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TRPC3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TRPC3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.