Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Plasmide CRISPR/Cas9 KO TRP2/DCT (h): sc-400334
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- TRP2/DCT Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique TRP2/DCT, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TRP2/DCT Antibody (C-9): sc-74439
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO TRP2/DCT (h) | sc-400334 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
DCT code pour la dopachrome tautomérase (TRP2/DCT), une enzyme mélanosomale qui catalyse la conversion du dopachrome en DHICA lors de la biosynthèse de l’eumélanine. Agissant en aval de la tyrosinase et de manière coordonnée avec TYRP1, TRP2/DCT soutient la mélanogenèse, la maturation des mélanosomes et l’équilibre rédox dans les cellules productrices de pigments. Son expression est régulée par des programmes transcriptionnels de lignée tels que MITF et s’articule avec des voies contrôlant la pigmentation et les réponses au stress oxydatif. Des altérations de l’activité ou de l’expression de DCT ont été associées à des phénotypes de pigmentation et sont fréquemment étudiées dans le cadre de la biologie du mélanome et de la présentation d’antigènes.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TRP2/DCT (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DCT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DCT, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DCT à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TRP2/DCT.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DCT pour l'étude de la signalisation de TRP2/DCT, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de DCT essentiels à la fonction de TRP2/DCT
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DCT pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le TRP2/DCT plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TRP2/DCT plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DCT. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le TRP2/DCT plasmide HDR (h) et le TRP2/DCT (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DCT pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DCT définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.