Troponin I-SS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423457

Übersicht

Tnni1 kodiert die Isoform von Troponin I für die langsame Skelettmuskulatur (Troponin I-SS), eine inhibitorische Untereinheit des Troponin-Komplexes, der die Aktin-Myosin-Interaktion Ca²⁺-abhängig reguliert. Durch die Modulation der Ca²⁺-Empfindlichkeit der dünnen Filamente über Interaktionen mit Troponin C, Troponin T und Tropomyosin trägt Troponin I-SS dazu bei, Kontraktionskinetik und Relaxationseigenschaften in oxidativen, langsam zuckenden Muskelfasern festzulegen. Die Expression von Tnni1 und der Isoformwechsel sind eng mit der Reifung von Muskelfasern, neuromuskulärer Aktivität und metabolischen Anpassungswegen verknüpft, die Muskel-Performance und Ausdauer prägen. Eine Dysregulation der Zusammensetzung des Troponin-Komplexes und der sarkomerischen Ca²⁺-Handhabung ist für Studien zu Muskelschwäche, Myopathien sowie Umbauprozessen bei Alterung oder Inaktivität relevant, bei denen eine veränderte Kontraktionsregulation zum Funktionsverlust beiträgt.

Das Troponin I-SS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tnni1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tnni1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tnni1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Troponin I-SS-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tnni1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Troponin I-SS-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tnni1-Exone abzielen, die für die Troponin I-SS-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tnni1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Troponin I-SS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Troponin I-SS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tnni1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Troponin I-SS HDR-Plasmid (m) und Troponin I-SS HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tnni1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tnni1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.