Plasmide CRISPR/Cas9 KO Troponin I-C (m): sc-423459

Présentation

Tnni3 code l’isoforme cardiaque de la troponine I, qui forme avec la troponine T et la troponine C un complexe régulateur sur le filament fin afin de contrôler l’interaction actine–myosine lors du couplage excitation–contraction. Par une modulation Ca²⁺-dépendante de l’activité ATPasique de la myosine, la troponine I contribue à ajuster la contractilité et la relaxation du sarcomère, en intégrant des signaux tels que la phosphorylation médiée par des kinases, qui modifie la sensibilité des myofilaments au Ca²⁺. Dans les cardiomyocytes de souris, Tnni3 est essentiel à l’organisation du sarcomère et aux processus de gestion du calcium qui sous-tendent le débit cardiaque. Les altérations de la fonction ou de la régulation de la troponine I sont fréquemment étudiées dans le contexte des mécanismes de cardiomyopathie, du dysfonctionnement contractile et des phénotypes de remodelage induits par le stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Troponin I-C (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tnni3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tnni3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tnni3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Troponin I-C.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tnni3 pour l'étude de la signalisation de Troponin I-C, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tnni3 essentiels à la fonction de Troponin I-C
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tnni3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Troponin I-C plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Troponin I-C plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tnni3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Troponin I-C plasmide HDR (m) et le Troponin I-C (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tnni3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tnni3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.