Troponin C fast skeletal Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423432

Descripción general

Tnnc2 codifica la troponina C de músculo esquelético de contracción rápida, una subunidad reguladora del complejo de troponina que se une a Ca2+ y controla la activación del filamento delgado y el ciclo de puentes cruzados en el músculo esquelético de fibras rápidas. Al detectar los transitorios citosólicos de Ca2+, TNNC2 coordina el desplazamiento de la tropomiosina sobre la actina para modular la actividad ATPasa de la actomiosina y la fuerza contráctil durante el acoplamiento excitación–contracción. Esta proteína se integra con vías de manejo del calcio y de organización del sarcómero, conectando la dinámica de señalización intracelular con la salida mecánica en las miofibras. Las alteraciones en la función del complejo de troponina y en la sensibilidad al Ca2+ son relevantes para estudios sobre el rendimiento del músculo esquelético, la fisiología de los tipos de miofibras y los mecanismos que contribuyen a fenotipos de debilidad muscular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Troponin C fast skeletal (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tnnc2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tnnc2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tnnc2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Troponin C fast skeletal.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tnnc2 para la investigación de la señalización de Troponin C fast skeletal, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tnnc2 críticos para la función de Troponin C fast skeletal
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tnnc2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Troponin C fast skeletal CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Troponin C fast skeletal CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tnnc2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Troponin C fast skeletal (m) y el plásmido HDR Troponin C fast skeletal (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tnnc2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tnnc2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.