Troponin C CRISPR Activation Plasmid (h): sc-406429-ACT

TNNC1 kodiert das kardiale/langsame skelettale Troponin C, ein Ca2+-bindendes EF-Hand-Protein, das als Calciumsensor innerhalb des Troponin-Komplexes der dünnen Filamente fungiert und so die Aktin-Myosin-Interaktion sowie die Sarkomer-Kontraktion reguliert. Nach der Ca2+-Bindung löst Troponin C Konformationsänderungen aus, die die durch Tropomyosin vermittelte Hemmung aufheben und die Erregungs-Kontraktions-Kopplung mit der Krafterzeugung in quergestreifter Muskulatur verknüpfen. Die TNNC1-Aktivität steht im Schnittpunkt von Signalwegen der Calciumhomöostase und des kontraktilen Apparats, die Myofibrillenaufbau, Muskelenergetik und Mechanotransduktion prägen. Eine fehlregulierte TNNC1-Expression oder -Funktion wird mit erblichen Kardiomyopathien und kontraktilen Phänotypen in Verbindung gebracht, was seinen Einsatz in Studien zur Sarkomerbiologie und zu Mechanismen kardialer Erkrankungen unterstützt.

Troponin C Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TNNC1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Troponin C Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TNNC1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TNNC1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Troponin C-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TNNC1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Troponin C-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Troponin C-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TNNC1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.