Plasmide CRISPR d'Activation (h) Troponin C: sc-403315-ACT

Le gène humain **TNNC2** code la troponine C, une sous-unité régulatrice du complexe de la troponine qui se lie au Ca2+ et contrôle les interactions actine–myosine dans le muscle strié. En détectant les transitoires calciques cytosoliques via des motifs de type EF-hand, la troponine C induit des changements conformationnels du filament fin qui coordonnent le couplage excitation–contraction et la génération de force au niveau du sarcomère. La signalisation calcique dépendante de TNNC2 s’intègre à l’assemblage myofibrillaire et à la spécialisation fonctionnelle des fibres musculaires, influençant la cinétique de contraction dans le muscle à contraction rapide. Une altération de la sensibilité au calcium médiée par la troponine et de la régulation sarcomérique est pertinente pour l’étude de la faiblesse musculaire, des myopathies et, plus largement, de phénotypes de dysfonction du muscle squelettique.

Troponin C Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TNNC2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Troponin C Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TNNC2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TNNC2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Troponin C. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TNNC2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Troponin C au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Troponin C dans les cellules tumorales présentant une expression de TNNC2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.