Plasmide Double Nickase (h) TROP-2: sc-402046-NIC

TACSTD2 code pour TROP-2, une glycoprotéine de surface cellulaire qui module l’adhésion des cellules épithéliales, leur prolifération et les signaux de survie. TROP-2 peut activer des voies liées à la signalisation dépendante du calcium ainsi que des programmes associés aux voies MAPK/PI3K, qui influencent la progression du cycle cellulaire, la migration et l’organisation de la barrière épithéliale. Une expression aberrante de TACSTD2/TROP-2 est observée dans de nombreuses tumeurs malignes d’origine épithéliale et est également impliquée dans l’homéostasie de l’épithélium cornéen, ce qui la relie aux processus de régénération et de différenciation tissulaires. En tant que marqueur membranaire doté de capacités de signalisation, TROP-2 est fréquemment utilisé pour étudier les états de lignée épithéliale, l’hétérogénéité tumorale et les mécanismes qui gouvernent l’invasion et les métastases.

TROP-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TACSTD2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TACSTD2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TACSTD2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TACSTD2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.