Plasmide Double Nickase (h) TrkB: sc-400142-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TrkB correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TrkB Double Nickase (h) et le plasmide TrkB Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant NTRK2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TrkB Antibody (H-8): sc-136990
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) TrkB | sc-400142-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) TrkB | sc-400142-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NTRK2 code le récepteur tyrosine kinase TrkB, un récepteur à haute affinité du BDNF et de NT-4/5 qui régule la différenciation neuronale, la plasticité synaptique et la survie dépendante de l’activité. La liaison du ligand induit l’autophosphorylation de TrkB et active les voies de signalisation PI3K–AKT, RAS–MAPK/ERK et PLCγ afin de contrôler des programmes transcriptionnels, le remodelage du cytosquelette et des processus dépendants du calcium. En biologie humaine, une signalisation TrkB dérégulée a été impliquée dans des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, et elle est également étudiée dans des contextes oncogéniques où une activité altérée du récepteur peut influencer la prolifération et la migration. En tant que nœud de voie intégrant les signaux des neurotrophines aux réponses de croissance et de stress, TrkB est largement utilisé dans des études mécanistiques de la fonction des circuits, des décisions de destin cellulaire et de la transduction du signal.
TrkB Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NTRK2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NTRK2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NTRK2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NTRK2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.