Plasmide CRISPR d'Activation (h) TrkB: sc-400142-ACT

NTRK2 code la tyrosine kinase réceptrice humaine TrkB, un récepteur de haute affinité du BDNF et de neurotrophines apparentées, qui contrôle la différenciation neuronale, la plasticité synaptique et la survie cellulaire. Après liaison du ligand, TrkB active les cascades de signalisation PI3K–AKT, MAPK/ERK et PLCγ, lesquelles coordonnent des programmes transcriptionnels, le remodelage du cytosquelette et une connectivité dépendante de l’activité. La signalisation TrkB est au cœur du neurodéveloppement et du maintien des circuits, et une dérégulation de l’expression de NTRK2 ou du couplage des voies en aval a été associée à des altérations de la fonction neuronale dans des contextes de maladies neuropsychiatriques et neurodégénératives. En tant que récepteur nodal des voies des neurotrophines, NTRK2 est fréquemment étudié pour ses effets sur les transitions d’état cellulaire, les réponses au stress et l’expression génique induite par des stimuli.

TrkB Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NTRK2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TrkB Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NTRK2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NTRK2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TrkB. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NTRK2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TrkB au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TrkB dans les cellules tumorales présentant une expression de NTRK2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.