Plasmide CRISPR d'Activation (h) Trk C: sc-400854-ACT

NTRK3 code pour le récepteur tyrosine kinase Trk C, un récepteur des neurotrophines à haute affinité qui répond principalement à la neurotrophine-3 afin de réguler la différenciation neuronale, la survie et la plasticité synaptique. Lors de la liaison du ligand, Trk C active la signalisation canonique des récepteurs tyrosine kinases via les voies MAPK/ERK, PI3K/AKT et PLCγ, coordonnant des programmes transcriptionnels et le remodelage du cytosquelette. Outre ses rôles dans le développement neuronal et le maintien des circuits, une signalisation NTRK3 dérégulée et des réarrangements géniques ont été associés à une altération de la signalisation des facteurs de croissance, à des défauts de spécification de lignée et à l’activation de voies oncogéniques dans de multiples contextes tumoraux. Ces propriétés font de Trk C un nœud utile pour étudier la biologie des neurotrophines, le trafic des récepteurs et les interactions entre voies de signalisation qui influencent les décisions de destinée cellulaire.

Trk C Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NTRK3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Trk C Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NTRK3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NTRK3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Trk C. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NTRK3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Trk C au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Trk C dans les cellules tumorales présentant une expression de NTRK3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.