Plasmide Double Nickase (h) TRIP13: sc-404006-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TRIP13 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TRIP13 Double Nickase (h) et le plasmide TRIP13 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TRIP13. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TRIP13 Antibody (A-7): sc-514285
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) TRIP13 | sc-404006-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) TRIP13 | sc-404006-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TRIP13 (thyroid hormone receptor interactor 13) code une ATPase de la famille AAA+ qui remodèle les protéines à domaine HORMA afin de réguler l’extinction du point de contrôle d’assemblage du fuseau (spindle assembly checkpoint) et d’assurer une ségrégation fidèle des chromosomes pendant la mitose. En contrôlant la stabilité des attaches kinétochore–microtubule et la signalisation du checkpoint, TRIP13 contribue à l’intégrité du génome et à la bonne progression du cycle cellulaire. Une activité dérégulée de TRIP13 a été associée à une instabilité chromosomique et à une capacité proliférative altérée, ce qui en fait un facteur pertinent dans l’étude de l’aneuploïdie, des réponses aux dommages de l’ADN et de la biologie tumorale. L’analyse fonctionnelle de TRIP13 est donc informative pour les voies reliant la surveillance mitotique à la stabilité génomique et aux décisions de destin cellulaire.
TRIP13 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TRIP13 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TRIP13. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TRIP13. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TRIP13.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.