Plasmide CRISPR/Cas9 KO TRIP12 (m): sc-420729

Présentation

Trip12 code TRIP12, une ligase E3 de type HECT qui catalyse le transfert d’ubiquitine afin de réguler le renouvellement des protéines et l’amplitude des voies de signalisation. Dans les cellules murines, TRIP12 contribue à la protéostase dépendante de l’ubiquitine et influence des processus tels que les réponses aux dommages de l’ADN, la régulation transcriptionnelle et le contrôle du cycle cellulaire en modulant la stabilité de facteurs régulateurs clés. En tant que composant du système ubiquitine–protéasome, l’ubiquitination liée à TRIP12 peut affecter l’adaptation au stress et le maintien de l’intégrité génomique. Une activité altérée des ligases d’ubiquitine est fréquemment associée à une croissance dérégulée et à des phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui fait de Trip12 une cible pertinente pour des études mécanistiques de l’homéostasie cellulaire et des voies associées aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TRIP12 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Trip12 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Trip12, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Trip12 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TRIP12.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Trip12 pour l'étude de la signalisation de TRIP12, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Trip12 essentiels à la fonction de TRIP12
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Trip12 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TRIP12 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TRIP12 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Trip12. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TRIP12 plasmide HDR (m) et le TRIP12 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Trip12 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Trip12 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.