Trio CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401231

Übersicht

TRIO kodiert Trio, einen großen, multidomänigen Rho-Guaninnukleotid-Austauschfaktor (GEF), der die GTPasen Rac1 und RhoA aktiviert, um den Umbau des Aktinzytoskeletts, den Membrantransport und die Zellpolarität zu koordinieren. Trio integriert Signale von Zelloberflächenrezeptoren in nachgeschaltete Signalwege, die das Neuritenauswachsen, die Axonleitung und die Organisation von Synapsen steuern, und übernimmt darüber hinaus Funktionen bei Zellmigration und -adhäsion. Fehlregulierte TRIO-Signalgebung und Varianten, die die GEF-Aktivität beeinflussen, wurden mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und verändertem Verhalten des Rho-GTPase-Netzwerks in unterschiedlichen zellulären Kontexten in Verbindung gebracht, was TRIO zu einem geeigneten Knotenpunkt für die Untersuchung der Zytoskelettkontrolle und Signalintegration macht.

Das Trio CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TRIO-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TRIO-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TRIO nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Trio-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TRIO-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Trio-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TRIO-Exone abzielen, die für die Trio-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TRIO-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Trio CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Trio CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TRIO-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Trio HDR-Plasmid (h) und Trio HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TRIO-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TRIO-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.