Plasmide Double Nickase (m) TRIM8: sc-429995-NIC

Trim8 code TRIM8, une ligase E3 à doigt RING de type TRIM qui régule la stabilité des protéines et la signalisation via des mécanismes dépendants de l’ubiquitine. Dans les cellules murines, TRIM8 a été associé à la modulation de voies clés du stress et de l’inflammation, notamment les réponses liées à p53, la signalisation NF-κB et les sorties de la voie JAK/STAT, influençant la prolifération, l’apoptose et les programmes transcriptionnels induits par les cytokines. Par ces fonctions, TRIM8 est fréquemment étudié dans des contextes d’intégrité du génome, de régulation de l’immunité innée et de décisions de destin cellulaire. Une activité de TRIM8 dérégulée a été associée à des processus pathologiques impliquant une signalisation inflammatoire aberrante et une altération du fonctionnement des réseaux suppresseurs de tumeurs, ce qui souligne sa pertinence pour la recherche sur des modèles de maladie.

TRIM8 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Trim8 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Trim8. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Trim8. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Trim8.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.