Plasmide CRISPR/Cas9 KO TRIM69 (h): sc-404906

Présentation

TRIM69 code une ligase E3 d’ubiquitine de la famille des motifs tripartites (TRIM), caractérisée par des domaines RING, B-box et en hélice enroulée (coiled-coil) qui médiatisent les interactions protéine–protéine et la signalisation dépendante de l’ubiquitine. TRIM69 a été impliquée dans la régulation de l’immunité innée, notamment via la modulation des voies stimulées par les interférons et des mécanismes de restriction antivirale, en contrôlant la stabilité de ses substrats et les réponses transcriptionnelles en aval. En influençant l’ubiquitination et la protéostase, TRIM69 peut façonner les réponses cellulaires au stress et des réseaux de signalisation qui recoupent des programmes inflammatoires. Une activité altérée des protéines de la famille TRIM est largement pertinente pour la dérégulation immunitaire et la signalisation oncogénique, ce qui fait de TRIM69 une cible utile pour des études mécanistiques dans ces contextes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TRIM69 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TRIM69 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TRIM69, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TRIM69 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TRIM69.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TRIM69 pour l'étude de la signalisation de TRIM69, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TRIM69 essentiels à la fonction de TRIM69
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TRIM69 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TRIM69 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TRIM69 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TRIM69. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TRIM69 plasmide HDR (h) et le TRIM69 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TRIM69 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TRIM69 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.