Plasmide Double Nickase (h) TRIM5α: sc-409348-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TRIM5α correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TRIM5α Double Nickase (h) et le plasmide TRIM5α Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TRIM5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) TRIM5α | sc-409348-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) TRIM5α | sc-409348-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TRIM5 (TRIM5α) est une ligase E3 d’ubiquitine à motif tripartite, inductible par l’interféron, qui agit comme facteur intrinsèque de restriction contre l’infection rétrovirale en reconnaissant les capsides entrantes et en déclenchant un décapsidage prématuré. Grâce à son activité d’ubiquitination dépendante du domaine RING et à l’assemblage en réseaux (lattices) d’ordre supérieur, TRIM5α active des voies de signalisation de l’immunité innée, notamment NF-κB et AP-1, et s’articule avec les mécanismes de contrôle de la qualité des protéines liés au protéasome et à l’autophagie. TRIM5α participe aussi à la reconnaissance de motifs dans le cytosol et contribue à façonner des programmes transcriptionnels inflammatoires après une agression virale. Les variations ou une régulation altérée de TRIM5 ont été étudiées en lien avec la susceptibilité à la réplication rétrovirale, la réactivité immunitaire antivirale et, plus largement, la dérégulation de la signalisation de l’immunité innée, pertinente pour des modèles de maladies inflammatoires.
TRIM5α Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TRIM5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TRIM5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TRIM5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TRIM5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.