Plasmide CRISPR/Cas9 KO TRIM41 (h): sc-413871

Présentation

TRIM41 code une protéine à motif tripartite (TRIM) possédant une activité de ligase E3 de l’ubiquitine de type doigt RING, qui contribue à la protéostasie dépendante de l’ubiquitine et à la régulation des complexes de signalisation. Dans le cadre des réseaux de la famille TRIM, TRIM41 participe au contrôle de la stabilité et du renouvellement des protéines, influençant des voies liées à la régulation de l’immunité innée, aux réponses au stress et au maintien de l’homéostasie cellulaire. Des dynamiques d’ubiquitination altérées impliquant des protéines TRIM ont été associées à une dérégulation des signaux inflammatoires et à des phénotypes oncogéniques, faisant de TRIM41 une cible utile pour disséquer la contribution des voies de l’ubiquitine à des états cellulaires pertinents pour la maladie. L’étude fonctionnelle de TRIM41 soutient les travaux sur la reconnaissance des substrats, les interactions entre modifications post-traductionnelles et les effets au niveau des voies sur les sorties transcriptionnelles et protéomiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TRIM41 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TRIM41 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TRIM41, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TRIM41 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TRIM41.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TRIM41 pour l'étude de la signalisation de TRIM41, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TRIM41 essentiels à la fonction de TRIM41
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TRIM41 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TRIM41 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TRIM41 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TRIM41. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TRIM41 plasmide HDR (h) et le TRIM41 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TRIM41 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TRIM41 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.