Plasmide CRISPR d'Activation (h2) TRIM14: sc-405847-ACT-2

Le TRIM14 humain (tripartite motif-containing 14) code un adaptateur cytosolique de la famille TRIM impliqué dans la régulation de l’immunité innée, où il sert d’échafaudage à des complexes de signalisation modulant l’induction des interférons de type I et des programmes transcriptionnels inflammatoires en aval des récepteurs de reconnaissance des motifs (PRR). TRIM14 participe aux voies de défense antivirale en influençant la propagation des signaux dépendante de l’ubiquitine ainsi que la stabilité ou l’activité de médiateurs clés tels que des composants associés à cGAS–STING, à MAVS et à NF-κB, façonnant la production de cytokines et l’expression des gènes stimulés par les interférons. Une signalisation de TRIM14 dérégulée a été associée à des réponses hôte–pathogène altérées et à une physiopathologie liée à l’immunité, notamment l’inflammation chronique et des contextes pertinents pour l’échappement immunitaire des cancers. L’édition du gène TRIM14 et les outils de génomique fonctionnelle permettent des études mécanistiques de la signalisation des PRR, des interactions croisées avec les voies de l’ubiquitine et des réseaux transcriptionnels induits par l’interféron dans les cellules humaines.

TRIM14 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TRIM14 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TRIM14 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TRIM14 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TRIM14, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TRIM14. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TRIM14 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TRIM14 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TRIM14 dans les cellules tumorales présentant une expression de TRIM14 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.