Particules Lentivirales d'Activation (h) TRF2: sc-401289-LAC

TERF2 code le facteur 2 de liaison aux répétitions télomériques (TRF2), un composant central du complexe shelterin qui se fixe à l’ADN télomérique double brin afin de préserver l’intégrité des extrémités chromosomiques. TRF2 réprime la signalisation aberrante des dommages à l’ADN dépendante d’ATM ainsi que la jonction d’extrémités non homologues (NHEJ) classique aux télomères, empêchant ainsi les fusions télomère‑télomère et maintenant la stabilité du génome durant la réplication. En coordonnant la formation de la boucle télomérique (T‑loop) et la réplication des télomères, TRF2 influence la progression du cycle cellulaire, la capacité réplicative et les programmes de sénescence. Un dérèglement de la fonction TERF2/TRF2 est impliqué dans la dysfonction télomérique, l’instabilité chromosomique et des réponses altérées aux dommages de l’ADN, des aspects pertinents pour les études en biologie du cancer, du vieillissement et des maladies de maintenance du génome liées aux télomères.

Les particules d'activation lentivirales TRF2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TERF2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TRF2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TERF2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TRF2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TERF2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.