Plásmido CRISPR de Activación (h) TRF2: sc-401289-ACT

El gen humano **TERF2** codifica el **factor 2 de unión a repeticiones teloméricas (TRF2)**, un componente central de **shelterin** que se une al ADN telomérico de doble cadena para promover la formación de **t-loops** y proteger los extremos cromosómicos de ser reconocidos como roturas de doble cadena del ADN. TRF2 suprime la señalización de daño en el ADN dependiente de **ATM** y limita las fusiones cromosómicas extremo con extremo al impedir la **unión de extremos no homólogos** inapropiada en los telómeros, lo que contribuye a la estabilidad del genoma y a una progresión adecuada del ciclo celular. A través de sus funciones en el “capuchón” telomérico, la replicación y la homeostasis de la longitud telomérica, TERF2 ayuda a coordinar la biología de los telómeros con las vías de reparación del ADN y de puntos de control. La desregulación de TRF2 se ha asociado con fenotipos de disfunción telomérica y se estudia con frecuencia en contextos de inestabilidad genómica vinculada a procesos relacionados con el envejecimiento y la biología del cáncer.

TRF2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TERF2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TRF2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TERF2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TERF2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TRF2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TERF2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TRF2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TRF2 en células tumorales con expresión de TERF2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.