Plasmide CRISPR/Cas9 KO TRC8 (m): sc-429220
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- TRC8 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique TRC8, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TRC8 Antibody (H-9): sc-390347
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO TRC8 (m) | sc-429220 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Rnf139 code TRC8, une ligase E3 d’ubiquitine à doigts RING, multipasse et associée au réticulum endoplasmique (RE). TRC8 contribue au contrôle, dépendant de l’ubiquitine, de la stabilité des protéines, reliant le contrôle qualité des protéines à la membrane du RE ainsi que la régulation liée aux stérols et aux lipides à des voies plus larges de protéostasie. En modulant l’ubiquitination et le renouvellement de certains substrats, TRC8 peut influencer le contrôle de la croissance cellulaire, les réponses au stress et des réseaux de signalisation coordonnés au niveau du RE. La dérégulation de la signalisation ubiquitine médiée par RNF139/TRC8 a été étudiée dans le contexte d’une prolifération altérée et de la stabilité du génome, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de voies associées aux maladies dans des modèles murins.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TRC8 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Rnf139 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Rnf139, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Rnf139 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TRC8.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Rnf139 pour l'étude de la signalisation de TRC8, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Rnf139 essentiels à la fonction de TRC8
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Rnf139 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le TRC8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TRC8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Rnf139. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le TRC8 plasmide HDR (m) et le TRC8 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Rnf139 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Rnf139 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.