Particules Lentivirales d'Activation (h) TRB-3: sc-401746-LAC

TRIB3 code la pseudokinase tribbles 3 (TRB‑3), un adaptateur de type kinase dépourvu d’activité catalytique qui module la transduction du signal en servant d’échafaudage aux interactions protéine‑protéine. TRB‑3 est surtout connue pour réguler négativement l’axe PI3K/AKT via son interaction avec AKT, influençant ainsi la signalisation de l’insuline, le métabolisme cellulaire et les programmes d’adaptation au stress. Elle intègre également les réponses au stress du réticulum endoplasmique et peut recouper des voies liées à MAPK et à TGF‑β/SMAD, contribuant à façonner la survie cellulaire, la différenciation et la signalisation inflammatoire. Une expression dérégulée de TRIB3 a été associée à des dysfonctionnements métaboliques, à des processus cardiovasculaires et neurodégénératifs, ainsi qu’à des phénotypes pertinents en oncologie, tels qu’une apoptose altérée et une tolérance au stress thérapeutique, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques centrées sur les voies de signalisation.

Les particules d'activation lentivirales TRB-3 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TRIB3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TRB-3 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TRIB3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TRB-3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TRIB3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.