Plasmide CRISPR/Cas9 KO Trap1a (m): sc-423500

Présentation

Trap1a code une chaperonne de la famille HSP90 mitochondriale qui soutient la protéostasie en stabilisant et en repliant des protéines clientes au sein de l’organite. Trap1a influence la respiration mitochondriale, l’homéostasie des espèces réactives de l’oxygène et les voies de signalisation d’adaptation au stress, en s’intégrant à des réseaux qui régulent l’apoptose et la reprogrammation métabolique. En modulant l’efficacité de la phosphorylation oxydative et le contrôle qualité mitochondrial, Trap1a contribue aux réponses cellulaires à l’hypoxie, à la limitation en nutriments et au stress protéotoxique. Une activité TRAP1 dérégulée a été associée à des altérations de la bioénergétique et de la tolérance au stress observées dans plusieurs contextes pertinents pour la maladie, notamment la neurodégénérescence et des phénotypes métaboliques associés aux tumeurs, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Trap1a (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Trap1a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Trap1a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Trap1a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Trap1a.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Trap1a pour l'étude de la signalisation de Trap1a, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Trap1a essentiels à la fonction de Trap1a
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Trap1a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Trap1a plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Trap1a plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Trap1a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Trap1a plasmide HDR (m) et le Trap1a (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Trap1a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Trap1a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.