TRAP150 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402921-ACT

O THRAP3 humano codifica a TRAP150, um fator nuclear de ligação a RNA e associado à transcrição que acopla o processamento de pré-mRNA à regulação transcricional. A TRAP150 participa de complexos associados ao espliceossomo e modula o splicing alternativo e a maturação do mRNA, sustentando programas coordenados de expressão gênica. Ela tem sido relacionada ao controle da transcrição responsiva a dano no DNA e a processos de controle de qualidade de RNA, incluindo o metabolismo de RNA associado ao estresse. A desregulação de redes de processamento de RNA dependentes de THRAP3/TRAP150 tem sido implicada em alterações no controle do ciclo celular e em estados transcricionais oncogênicos em contextos relevantes para o câncer.

TRAP150 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de THRAP3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TRAP150 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus THRAP3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição THRAP3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TRAP150. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus THRAP3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TRAP150 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TRAP150 em células tumorais com expressão de THRAP3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.