translin Plasmide Double Nickase (h): sc-407354-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- translin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il translin Double Nickase Plasmid (h) e il translin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TSN. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: translin Antibody (C-2): sc-390472
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
translin Plasmide Double Nickase (h) | sc-407354-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
translin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-407354-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TSN codifica translin, una proteina conservata legante gli acidi nucleici che forma un complesso con trax e contribuisce al metabolismo dell’RNA, inclusa la regolazione della stabilità dell’mRNA, del trasporto e delle vie dei piccoli RNA. Translin è stata collegata al controllo genico post-trascrizionale nel citoplasma e nel nucleo ed è implicata in processi quali le risposte allo stress e la funzione neuronale attraverso la modulazione del destino dell’RNA. Un’attività alterata di TSN/translin è stata associata in letteratura a programmi di espressione genica deregolati osservati nella biologia del cancro e a fenotipi neuroevolutivi o neuropsichiatrici. Queste caratteristiche rendono TSN un nodo utile per studiare la regolazione dello stato cellulare e la plasticità delle vie di segnalazione con un focus sui meccanismi centrati sull’RNA.
translin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TSN nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TSN. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TSN. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TSN interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.