Plasmide CRISPR/Cas9 KO TRAIL (m): sc-423498-KO-2
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- TRAIL Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique TRAIL, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TRAIL Antibody (N2B2): sc-56245
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO TRAIL (m) | sc-423498-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Tnfsf10 code le ligand murin apparenté au TNF induisant l’apoptose (TRAIL), une protéine membranaire de type II pouvant être libérée par clivage protéolytique et qui transmet des signaux via des récepteurs de mort afin d’initier l’apoptose extrinsèque par activation de la caspase-8 dépendante de FADD. Au-delà de la signalisation apoptotique, TRAIL module, selon le contexte, les réponses des voies NF-κB et MAPK, influençant la signalisation inflammatoire, la survie cellulaire et l’homéostasie immunitaire. Dans des modèles murins, la biologie de TRAIL est fréquemment étudiée dans des travaux sur la surveillance immunitaire des tumeurs, l’auto-immunité et les lésions tissulaires, où la signalisation des récepteurs de mort s’entrecroise avec les réseaux de cytokines et les réponses au stress.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TRAIL (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tnfsf10 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tnfsf10, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tnfsf10 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TRAIL.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tnfsf10 pour l'étude de la signalisation de TRAIL, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Tnfsf10 essentiels à la fonction de TRAIL
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tnfsf10 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le TRAIL plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TRAIL plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tnfsf10. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le TRAIL plasmide HDR (m) et le TRAIL (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tnfsf10 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tnfsf10 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.