Plasmide CRISPR/Cas9 KO TRAIL (h): sc-418124
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- TRAIL Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique TRAIL, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TRAIL Antibody (D-3): sc-8440
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO TRAIL (h) | sc-418124 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
TNFSF10 code pour le ligand inducteur d’apoptose lié au TNF (TRAIL), une cytokine transmembranaire de type II pouvant être libérée par clivage protéolytique sous forme soluble. TRAIL se lie à des récepteurs de mort et déclenche l’apoptose extrinsèque via l’activation de la caspase‑8/10 dépendante de FADD, avec une interconnexion en aval avec l’amplification mitochondriale et une modulation par les voies de signalisation NF‑κB et MAPK. Par ces mécanismes, TRAIL contribue à la surveillance immunitaire, à la régulation de l’inflammation et aux décisions de destinée cellulaire qui influencent l’homéostasie tissulaire. Une dérégulation de la signalisation TNFSF10/TRAIL a été associée à une sensibilité altérée à l’apoptose et à des phénotypes d’échappement immunitaire observés dans divers contextes de recherche sur le cancer et les maladies inflammatoires.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TRAIL (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TNFSF10 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TNFSF10, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TNFSF10 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TRAIL.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TNFSF10 pour l'étude de la signalisation de TRAIL, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de TNFSF10 essentiels à la fonction de TRAIL
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TNFSF10 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le TRAIL plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TRAIL plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TNFSF10. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le TRAIL plasmide HDR (h) et le TRAIL (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TNFSF10 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TNFSF10 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.