Particules Lentivirales d'Activation (h) TRAF6: sc-400117-LAC

TRAF6 (TNF receptor–associated factor 6) est une ligase E3 de l’ubiquitine et une protéine adaptatrice qui relie les récepteurs situés en amont à la signalisation en aval dans l’immunité innée et l’inflammation. Il assure une polyubiquitination liée à K63 afin d’activer TAK1 et le complexe IKK, ce qui stimule les voies NF-κB et MAPK (JNK/p38), et il s’interface également, dans certains contextes, avec des réponses dépendantes des IRF. TRAF6 agit en aval des récepteurs Toll-like, des membres de la famille du récepteur de l’IL-1 et de RANK, influençant la production de cytokines, la différenciation des ostéoclastes et les programmes de survie cellulaire. Une signalisation TRAF6 dérégulée a été associée à des états inflammatoires chroniques, des phénotypes auto-immuns, des défauts de remodelage osseux et des réseaux de signalisation oncogéniques dans plusieurs types de tumeurs.

Les particules d'activation lentivirales TRAF6 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TRAF6 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TRAF6 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TRAF6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TRAF6. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TRAF6 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.