Plasmide CRISPR/Cas9 KO TRAF4 (m): sc-423495
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- TRAF4 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique TRAF4, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TRAF4 Antibody (B-9): sc-390232
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO TRAF4 (m) | sc-423495 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Le facteur associé au récepteur du TNF 4 (TRAF4), codé par le gène murin *Traf4*, est une protéine adaptatrice et une ligase E3 de l’ubiquitine qui relie la signalisation proximale des récepteurs aux réseaux de kinases et de transcription en aval. TRAF4 participe à la régulation des voies de signalisation NF-κB et MAPK et a été associé à la dynamique du cytosquelette, à la polarité cellulaire et à des processus liés à la barrière épithéliale via des interactions dépendantes du contexte avec des complexes membranaires et jonctionnels. Dans les compartiments immunitaires et épithéliaux, l’activité de *Traf4* peut influencer l’amplitude des signaux inflammatoires et les réponses cellulaires au stress. Les voies dérégulées associées à TRAF4 ont été étudiées en lien avec la biologie tumorale, le remodelage tissulaire et les mécanismes des maladies inflammatoires, ce qui fait de *Traf4* une cible utile pour la dissection des voies de signalisation dans des modèles murins et des systèmes cellulaires.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TRAF4 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Traf4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Traf4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Traf4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TRAF4.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Traf4 pour l'étude de la signalisation de TRAF4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Traf4 essentiels à la fonction de TRAF4
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Traf4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le TRAF4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TRAF4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Traf4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le TRAF4 plasmide HDR (m) et le TRAF4 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Traf4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Traf4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.