Plasmide Double Nickase (h) TRAF3: sc-400473-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TRAF3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TRAF3 Double Nickase (h) et le plasmide TRAF3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TRAF3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TRAF3 Antibody (G-6): sc-6933
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) TRAF3 | sc-400473-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) TRAF3 | sc-400473-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TRAF3 (facteur 3 associé aux récepteurs du TNF) est une protéine adaptatrice et une ligase E3 de l’ubiquitine qui coordonne la signalisation en aval des membres de la superfamille des récepteurs du TNF, des récepteurs Toll-like et de certains récepteurs de reconnaissance de motifs. En régulant l’assemblage, dépendant de l’ubiquitine, des complexes de signalisation, TRAF3 module les réponses à l’interféron de type I, l’activité des MAPK et la sortie de la voie NF-κB, notamment en limitant la signalisation NF-κB non canonique via le contrôle de la stabilité de NIK. Ces fonctions font de TRAF3 un déterminant majeur de l’homéostasie de l’immunité innée et adaptative, en influençant la production de cytokines, la signalisation des récepteurs antigéniques et les décisions de survie cellulaire. Une expression ou une fonction altérée de TRAF3 est associée à une dérégulation immunitaire et a été rapportée dans des contextes de signalisation liés aux cancers, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique en recherche sur l’inflammation et la biologie du cancer.
TRAF3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TRAF3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TRAF3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TRAF3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TRAF3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.