Plasmide CRISPR d'Activation (m) TRAF3: sc-423494-ACT

Le gène **Traf3** de la souris code TRAF3, une protéine adaptatrice et ligase E3 de l’ubiquitine qui relie de multiples récepteurs à la signalisation en aval, notamment des membres de la superfamille des récepteurs du TNF, les récepteurs de type Toll (TLR) et les récepteurs de type RIG-I. TRAF3 contribue à l’équilibre entre l’activité NF-κB canonique et non canonique et régule les réponses d’interféron de type I dépendantes d’IRF3/IRF7 via un contrôle, dépendant de l’ubiquitine, de complexes kinasiques tels que TBK1 et IKK. Par ces voies, TRAF3 influence l’activation des cellules immunitaires innées et adaptatives, la production de cytokines et la défense antivirale. Une signalisation TRAF3 dérégulée a été associée à des déséquilibres immunitaires et à des phénotypes liés à l’inflammation, faisant de **Traf3** un nœud pertinent pour des études mécanistiques de la signalisation proximale aux récepteurs et des programmes transcriptionnels dans des modèles murins.

TRAF3 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Traf3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TRAF3 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Traf3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Traf3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TRAF3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Traf3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TRAF3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TRAF3 dans les cellules tumorales présentant une expression de Traf3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.