Plasmide CRISPR/Cas9 KO TRAF1 (m): sc-423492

Présentation

Traf1 code le facteur 1 associé au récepteur du facteur de nécrose tumorale (TRAF1), une protéine adaptatrice qui relie des membres de la superfamille des récepteurs du TNF à des complexes de signalisation en aval. Dans les contextes immunitaires et inflammatoires, TRAF1 module les voies de signalisation NF-κB canonique et non canonique, influence les réponses de la voie MAPK et contribue à orienter les décisions entre apoptose et survie via des interactions avec des protéines telles que TRAF2 et les cIAP. Ces activités participent à la régulation des réponses cytokiniques, à l’activation des lymphocytes et à la signalisation de l’immunité innée, faisant de Traf1 un nœud utile pour disséquer l’intégration des signaux dans les cellules immunitaires. La dérégulation des voies associées à TRAF1 a été impliquée dans des mécanismes de maladies inflammatoires et dans une signalisation du microenvironnement pertinente pour l’immuno-oncologie, ce qui soutient sa large utilité dans des modèles de recherche axés sur les voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TRAF1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Traf1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Traf1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Traf1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TRAF1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Traf1 pour l'étude de la signalisation de TRAF1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Traf1 essentiels à la fonction de TRAF1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Traf1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TRAF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TRAF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Traf1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TRAF1 plasmide HDR (m) et le TRAF1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Traf1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Traf1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.