Particules Lentivirales d'Activation (h) TRAC-1: sc-409980-LAC

RNF125 code TRAC-1, une ligase E3 ubiquitine de type RING qui module la signalisation immunitaire en contrôlant le renouvellement et l’activité, dépendants de l’ubiquitine, de protéines de signalisation clés. TRAC-1 a été impliquée dans la régulation des voies induites par le récepteur des lymphocytes T et par les cytokines, en façonnant les seuils d’activation, la prolifération lymphocytaire et les réponses inflammatoires via la protéostasie et des programmes transcriptionnels en aval. En influençant la dynamique de l’ubiquitination, RNF125 peut affecter des réponses cellulaires liées à l’immunité innée et adaptative, y compris la signalisation associée aux interférons. Une activité dérégulée de RNF125/TRAC-1 a été associée à des dysfonctionnements immunitaires et à des mécanismes de maladies inflammatoires, ce qui en fait une cible pertinente pour disséquer les circuits de signalisation dans des modèles cellulaires humains immunitaires et apparentés.

Les particules d'activation lentivirales TRAC-1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de RNF125 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TRAC-1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription RNF125, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TRAC-1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif RNF125 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.