Plasmide Double Nickase (h) TRAC-1: sc-409980-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TRAC-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TRAC-1 Double Nickase (h) et le plasmide TRAC-1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant RNF125. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) TRAC-1 | sc-409980-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) TRAC-1 | sc-409980-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF125 code l’E3 ubiquitine-ligase humaine TRAC-1, une protéine à doigt RING qui contribue à contrôler le renouvellement des protéines et l’amplitude des signaux dans les cellules immunitaires via des voies protéasomales dépendantes de l’ubiquitine. TRAC-1 a été impliquée dans la régulation des sorties de signalisation du récepteur des lymphocytes T (TCR) et des cytokines en modulant la stabilité et le trafic de composants de signalisation, ce qui façonne l’activation, la tolérance et les programmes transcriptionnels en aval. Au sein de réseaux plus larges d’ubiquitination, RNF125 s’articule avec des circuits de régulation de l’immunité innée et adaptative qui influencent les réponses inflammatoires et la fonction des lymphocytes dépendante de l’antigène. Une activité dérégulée de RNF125/TRAC-1 ainsi que des profils d’expression altérés ont été associés à des mécanismes de maladies immuno-médiées et inflammatoires, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de l’homéostasie immunitaire et du remodelage des voies de signalisation.
TRAC-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RNF125 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RNF125. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RNF125. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RNF125.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.