TRAC-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409980-ACT

RNF125 codifica a TRAC-1, uma ligase E3 de ubiquitina do tipo RING que modula a sinalização imune ao regular a renovação dependente de ubiquitinação de proteínas-chave nas vias do receptor de célula T e de resposta a citocinas. Ao controlar a estabilidade proteica e a amplitude do sinal, a TRAC-1 influencia a ativação de linfócitos, as respostas antivirais e programas de genes inflamatórios a jusante de vias como NF-κB e sinalização associada a interferons. Alterações na expressão ou na função de RNF125 foram associadas a desregulação imune e a fenótipos imunes relacionados ao câncer, tornando-o relevante para o estudo de mecanismos de vigilância imunológica e de interações tumor–sistema imune. Em modelos celulares humanos, RNF125 é frequentemente investigado para compreender como o sistema ubiquitina–proteassoma controla limiares de sinalização e estados transcricionais específicos de linhagem.

TRAC-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RNF125 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TRAC-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RNF125 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RNF125, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TRAC-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RNF125 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TRAC-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TRAC-1 em células tumorais com expressão de RNF125 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.