Plasmide CRISPR d'Activation (h) Tra-2: sc-404739-ACT

Le gène humain **TRA2B** code Tra-2, un régulateur d’épissage se liant à l’ARN qui reconnaît des éléments exoniques activateurs de l’épissage (ESE, *exonic splicing enhancers*) et module l’inclusion d’exons au sein de diverses cibles d’ARN pré-messagers. Tra-2 participe à des réseaux associés au spliceosome qui façonnent des programmes d’épissage alternatif contrôlant la progression du cycle cellulaire, la différenciation et les sorties transcriptionnelles en réponse au stress. Une expression ou une activité dérégulée de **TRA2B** a été associée à de vastes altérations d’épissage observées en contexte cancéreux et neurodéveloppemental, où un déséquilibre des isoformes peut remodeler la signalisation et le métabolisme de l’ARN. En tant que nœud central de la régulation post-transcriptionnelle de l’expression génique, **TRA2B** est fréquemment étudié pour relier le contrôle d’épissage spécifique de séquence au remaniement des voies et aux changements du transcriptome associés aux maladies.

Tra-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TRA2B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Tra-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TRA2B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TRA2B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Tra-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TRA2B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Tra-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Tra-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de TRA2B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.