TR2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423489

Übersicht

Maus-Nr2c1 kodiert den verwaisten nukleären Rezeptor TR2, einen sequenzspezifischen Transkriptionsfaktor, der an Hormon-Response-Elemente bindet und Genexpressionsprogramme moduliert, die mit Zellschicksalsentscheidungen verknüpft sind. TR2 ist an der Signalübertragung nukleärer Rezeptoren sowie an Netzwerken von Transkriptions-Koregulatoren beteiligt, die Differenzierung, Proliferation und die metabolische Homöostase beeinflussen; besonders ausgeprägte Rollen wurden in der Entwicklung von Keimzellen und in Pluripotenz-assoziierten Regulationsschaltkreisen beschrieben. Über diese transkriptionellen Funktionen kann NR2C1 den Chromatinzustand und Signalwege der Linienfestlegung beeinflussen, die bei Entwicklungsstörungen und in der krebsassoziierten Fehlregulation der Transkription häufig gestört sind. Entsprechend ist Nr2c1 ein nützliches Ziel, um in Mausmodellen genregulatorische Mechanismen zu untersuchen, die stammzellähnlichen Zuständen und gewebespezifischer Differenzierung zugrunde liegen.

Das TR2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Nr2c1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Nr2c1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Nr2c1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TR2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Nr2c1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TR2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Nr2c1-Exone abzielen, die für die TR2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Nr2c1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TR2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TR2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Nr2c1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TR2 HDR-Plasmid (m) und TR2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Nr2c1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Nr2c1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.