Plasmide CRISPR d'Activation (h) TPPP: sc-405957-ACT

Le gène humain **TPPP** (*tubulin polymerization promoting protein*) code un facteur associé aux microtubules qui se lie à la tubuline et favorise la polymérisation ainsi que le faisceau (bundling) des microtubules, contribuant à l’organisation du cytosquelette et à la morphologie cellulaire. TPPP est enrichi dans les oligodendrocytes et est associé à la formation et au maintien de la gaine de myéline, ce qui le rattache à des processus coordonnant la dynamique des microtubules, le transport intracellulaire et les programmes de différenciation dans le système nerveux. Une expression dérégulée de TPPP ou son agrégation a été rapportée dans des contextes liés à la neurodégénérescence, où une stabilité du cytosquelette et une homéostasie protéique altérées peuvent affecter la fonction des neurones et des cellules gliales. Ces propriétés font de TPPP une cible utile pour étudier le remodelage des microtubules, la biologie des oligodendrocytes et les mécanismes reliant la régulation du cytosquelette aux phénotypes des maladies neurologiques.

TPPP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TPPP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TPPP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TPPP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TPPP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TPPP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TPPP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TPPP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TPPP dans les cellules tumorales présentant une expression de TPPP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.