Plasmide Double Nickase (h) TPCN2: sc-402960-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TPCN2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TPCN2 Double Nickase (h) et le plasmide TPCN2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TPCN2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) TPCN2 | sc-402960-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) TPCN2 | sc-402960-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **TPCN2** (two-pore segment channel 2) code un canal cationique endolysosomal sensible au **NAADP** qui régule la libération de **Ca²⁺** à partir des organites acides, en couplant l’homéostasie ionique luminale à la signalisation cytosolique du Ca²⁺. L’activité de TPCN2 influence le trafic endosome–lysosome, le fonctionnement du système autophagie–lysosome, la fusion vésiculaire et des voies sensibles aux nutriments, notamment la signalisation **mTOR**. À travers ces processus, TPCN2 a été étudié dans le contexte de la biologie de la pigmentation, de la régulation métabolique et des réponses cellulaires au stress dépendant de la dynamique de signalisation lysosomale. Une gestion endolysosomale du Ca²⁺ dérégulée, liée à la fonction de TPCN2, est également pertinente dans des modèles de neurodégénérescence et d’entrée de pathogènes, où le trafic membranaire intracellulaire constitue un déterminant clé.
TPCN2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TPCN2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TPCN2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TPCN2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TPCN2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.