Particules Lentivirales d'Activation (h2) TP53INP2: sc-405261-LAC-2

Le gène humain TP53INP2 (tumor protein p53 inducible nuclear protein 2 ; également connu sous le nom de DOR) code un régulateur de l’autophagie sensible au stress, qui sert d’échafaudage pour le recrutement des protéines ATG et favorise la formation et la maturation des autophagosomes. TP53INP2 participe à des programmes de détection des nutriments et de régulation transcriptionnelle liés à la signalisation de p53 et à l’autophagie contrôlée par mTOR, influençant la protéostasie, le contrôle qualité mitochondrial et les décisions de survie cellulaire en situation de stress métabolique. Une expression ou une localisation dérégulée de TP53INP2 a été associée à une altération du flux autophagique dans des contextes pertinents pour la biologie du cancer, les maladies neurodégénératives et les troubles métaboliques, où une clairance défaillante peut affecter la stabilité génomique et l’inflammation. L’édition génomique de TP53INP2 permet des études mécanistiques de l’architecture des voies de l’autophagie, des relations d’épistasie avec les facteurs ATG centraux et des criblages de génomique fonctionnelle reliant la signalisation du stress à des phénotypes cellulaires pertinents pour les maladies.

Les particules d'activation lentivirales TP53INP2 (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TP53INP2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TP53INP2 (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TP53INP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TP53INP2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TP53INP2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.