Plásmido CRISPR de Activación (h) TP53INP2: sc-405261-ACT

TP53INP2 (proteína nuclear 2 inducible por la proteína tumoral p53) es una proteína sensible al estrés implicada en la regulación de la autofagia y el tráfico intracelular, con funciones descritas en la organización de la biogénesis de los autofagosomas y el apoyo a programas de autofagia selectiva. Se la ha relacionado con el transporte del citoplasma al núcleo y con interacciones con la maquinaria de la autofagia, conectando las respuestas al estrés asociadas a p53 con la remodelación catabólica. A través de estas funciones, TP53INP2 puede influir en la homeostasis celular bajo privación de nutrientes y otros factores de estrés, afectando vías que gobiernan la supervivencia, el metabolismo y el control de calidad. La desregulación de la autofagia y de la señalización de estrés en la que participa TP53INP2 es relevante para estudios mecanísticos en biología del cáncer, neurodegeneración y fenotipos inflamatorios en los que la proteostasis y la adaptación metabólica están alteradas.

TP53INP2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TP53INP2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TP53INP2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TP53INP2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TP53INP2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TP53INP2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TP53INP2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TP53INP2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TP53INP2 en células tumorales con expresión de TP53INP2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.