Plasmide CRISPR d'Activation (h) TP1: sc-404178-ACT

Le gène humain TEP1 code la protéine 1 associée à la télomérase (TP1), un composant central de la télomérase et de la machinerie de maintenance des télomères, qui contribue à la protection des extrémités chromosomiques et à la capacité de réplication à long terme. TP1 participe à l’assemblage et à la stabilité de la RNP de la télomérase et relie la biologie des télomères aux voies de maintien de l’intégrité du génome, notamment la signalisation des dommages à l’ADN et le contrôle du cycle cellulaire. La dérégulation des facteurs associés à la télomérase et de l’homéostasie des télomères est impliquée dans des phénotypes liés au vieillissement et dans de multiples contextes pathologiques caractérisés par une instabilité génomique. TEP1 est donc étudié dans des modèles de stress prolifératif, de sénescence et de modifications des programmes transcriptionnels induites par les télomères.

TP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TEP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TEP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TEP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TEP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de TEP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.