Plasmide CRISPR/Cas9 KO TorsinB (h): sc-407379

Présentation

TOR1B code pour la torsine B (TorsinB), une ATPase AAA+ localisée dans le réticulum endoplasmique et l’espace périnucléaire, qui contribue au contrôle qualité des protéines et au maintien de l’architecture de l’enveloppe nucléaire. La torsine B participe à des processus liés à l’homéostasie du RE, au remodelage membranaire et à la régulation de la biogenèse des complexes de pores nucléaires, souvent avec un chevauchement fonctionnel avec d’autres membres de la famille des torsines. La perturbation des voies médiées par les torsines peut altérer le couplage nucléo-cytosquelettique et les réponses au stress cellulaire, ce qui fait de TOR1B un gène pertinent pour l’étude de la fonction neuronale et de la biologie des troubles du mouvement. En tant que gène humain jouant des rôles à l’interface RE–enveloppe nucléaire, TOR1B est fréquemment étudié dans des modèles portant sur la protéostasie, la mécanotransduction et l’intégrité des organites.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TorsinB (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TOR1B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TOR1B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TOR1B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TorsinB.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TOR1B pour l'étude de la signalisation de TorsinB, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TOR1B essentiels à la fonction de TorsinB
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TOR1B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TorsinB plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TorsinB plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TOR1B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TorsinB plasmide HDR (h) et le TorsinB (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TOR1B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TOR1B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.