Plasmide Double Nickase (h) TORC2: sc-402481-NIC

Le CRTC2 humain (TORC2) est un coactivateur transcriptionnel régulé par CREB qui intègre les signaux dépendants de l’AMPc et du calcium afin de coordonner l’expression de gènes en réponse à des stimuli. Après déphosphorylation et translocation nucléaire, TORC2 renforce des programmes transcriptionnels pilotés par CREB impliqués dans la néoglucogenèse hépatique, l’homéostasie lipidique et énergétique, ainsi que les réponses adaptatives à l’état nutritionnel. L’activité de CRTC2 est modulée par des kinases telles qu’AMPK et les SIK, et s’articule avec la signalisation PKA et des réseaux transcriptionnels métaboliques. Une dérégulation de la signalisation de CRTC2 a été associée dans la littérature à des phénotypes métaboliques, notamment la résistance à l’insuline et des altérations de la gestion du glucose, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour les études de voies endocrines et métaboliques.

TORC2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CRTC2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CRTC2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CRTC2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CRTC2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.