Plasmide CRISPR/Cas9 KO Topo IIIβ (m): sc-423472

Présentation

Top3b code la topoisomérase III bêta de l’ADN (Topo IIIβ), une topoisomérase de type IA qui résout les contraintes topologiques et les intermédiaires de recombinaison au cours de la maintenance du génome. Dans les cellules murines, Topo IIIβ contribuerait à préserver l’intégrité des acides nucléiques grâce à des fonctions dans la réparation de l’ADN, les réponses au stress associé à la réplication et la régulation du métabolisme de l’ARN, en accord avec sa capacité à agir sur des substrats d’ADN comme d’ARN. Ces activités s’articulent avec des voies qui contrôlent les conflits transcription-réplication et la stabilité du génome dépendante de la recombinaison, des processus qui influencent l’homéostasie cellulaire. La perturbation du traitement des acides nucléiques dépendant de Top3b a été associée à des phénotypes d’instabilité génomique et présente un intérêt pour l’étude de mécanismes liés au neurodéveloppement et au cancer dans des systèmes modèles.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Topo IIIβ (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Top3b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Top3b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Top3b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Topo IIIβ.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Top3b pour l'étude de la signalisation de Topo IIIβ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Top3b essentiels à la fonction de Topo IIIβ
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Top3b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Topo IIIβ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Topo IIIβ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Top3b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Topo IIIβ plasmide HDR (m) et le Topo IIIβ (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Top3b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Top3b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.