Plasmide CRISPR/Cas9 KO Topo IIIα (m): sc-423471

Présentation

Top3a code la topoisomérase III alpha de l’ADN (Topo IIIα), une topoisomérase de type IA qui résout le stress topologique de l’ADN ainsi que des intermédiaires de recombinaison au cours de la réplication et de la réparation. Dans les cellules de souris, Topo IIIα agit au sein du complexe BTRR avec BLM, RMI1 et RMI2 pour catalyser la dissolution des doubles jonctions de Holliday, limitant les événements de crossing-over et favorisant le maintien fidèle du génome. Cette activité relie Topo IIIα aux voies de recombinaison homologue, de stabilité des fourches de réplication et de ségrégation des chromatides sœurs. La perturbation des processus associés à TOP3A est liée à des phénotypes d’instabilité génomique pertinents pour l’étude de la biologie du cancer, des anomalies du développement et des troubles de la réparation de l’ADN dans les systèmes mammifères.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Topo IIIα (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Top3a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Top3a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Top3a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Topo IIIα.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Top3a pour l'étude de la signalisation de Topo IIIα, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Top3a essentiels à la fonction de Topo IIIα
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Top3a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Topo IIIα plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Topo IIIα plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Top3a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Topo IIIα plasmide HDR (m) et le Topo IIIα (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Top3a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Top3a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.