Plásmido Doble Nickase (h) Topo IIβ: sc-400773-NIC

TOP2B codifica la topoisomerasa IIβ (Topo IIβ) humana, una enzima dependiente de ATP que resuelve el superenrollamiento del ADN y los catenanos generando roturas transitorias de doble cadena y religando posteriormente el ADN. La Topo IIβ es importante para la regulación transcripcional, la topología de la cromatina y la progresión adecuada durante la replicación del ADN y la segregación cromosómica, lo que la vincula con las vías de respuesta al daño en el ADN y de estabilidad genómica. Su actividad se cruza con procesos como la decatenación de cromátidas hermanas, el alivio del estrés torsional durante la transcripción y el mantenimiento de la estructura de cromatina de orden superior. La desregulación de la función de TOP2B o las roturas de ADN mediadas de forma aberrante por la topoisomerasa II se han asociado con inestabilidad genómica y programas de expresión génica alterados, estudiados en biología del cáncer y en modelos de neurodesarrollo.

Topo IIβ El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TOP2B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TOP2B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TOP2B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TOP2B alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.