Plasmide CRISPR d'Activation (h) Topo IIβ: sc-400773-ACT

TOP2B code la topoisomérase IIβ (Topo IIβ) humaine, une enzyme ATP-dépendante qui résout le surenroulement et l’emmêlement (caténation) de l’ADN en créant des cassures transitoires double brin puis en religuant l’ADN lors de la transcription et du remodelage de la chromatine. Topo IIβ contribue à l’organisation du génome et à la régulation à longue distance des gènes, participant aux programmes de transcription dépendants de l’ARN polymérase II et au maintien de la stabilité génomique. Son activité s’articule avec la signalisation de la réponse aux dommages de l’ADN, le contrôle topologique lié au cycle cellulaire et des commutations transcriptionnelles associées à la différenciation. Une dérégulation de la fonction ou de l’expression de TOP2B a été associée à des modifications des paysages transcriptionnels, à des phénotypes d’instabilité génomique et à des réponses au stress pertinentes pour la maladie, étudiées en biologie du cancer, en neurobiologie et dans les mécanismes de cardiotoxicité.

Topo IIβ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TOP2B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Topo IIβ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TOP2B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TOP2B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Topo IIβ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TOP2B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Topo IIβ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Topo IIβ dans les cellules tumorales présentant une expression de TOP2B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.